lunes, 5 de mayo de 2014
domingo, 16 de febrero de 2014
jueves, 6 de febrero de 2014
Pruebas Descripción y Resultados
| Prueba |
Descripción
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Resultado
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Agar
MacConckey |
Es un medio diferencial que permite distinguir entre
enterobacterias que hidrolizan lactosa y las que no lo hacen.
La hidrólisis de la lactosa produce ácidos orgánicos y las colonias que la hidrolizan adquieren un color rojo. Las colonias lactosas negativas permanecen incoloras aunque el medio tira a amarillo por la subida de pH que origina la utilización de las proteínas (peptona) del medio Se inoculan placas del medio y se incuban a 37 oC |
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Agar
sangre
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Medio de cultivo enriquecido con la adicción de sangre.
Las hemolisinas son enzimas que lisan los hematíes. Las bacterias que
producen estas enzimas presentan un halo transparente alrededor de las
colonias a consecuencia de la lisis de los hematíes.
Se siembre por agotamiento en estría en placas de agar sangre y se incuba |
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Betagalactosidasa
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Esta enzima hidroliza la lactosa originando glucosa y
galactosa
Se añade un sustrato artificial ortocitrofenial galactósido (ONPG) que hidrolizado por la ß-galatosidasa originándose en color amarillo |
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Catalasa
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La catalasa es una enzima que protege a las células frente
al peróxido de hidrógeno producido en el metabolismo del oxígeno. Cataliza la
formación de agua y oxígeno a partir del peróxido de hidrógeno.
Es útil para distinguir Streptococcus (negativa) de Staphylococcus (positiva) y Clostridium (negativa) de Bacillus (positiva) La actividad catalasa se detecta añadiendo unas gotas de peróxido de hidrógeno sobre las colonias en placa que no sea de agar sangre (daría falsos positivos). La producción de burbujas indica la presencia del enzima. |
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Citrato
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Es uno de los test del IMVIC usado para diferenciar
enterobacterias. el crecimiento consume el ácido y como consecuencia se
produce un incremento de pH en el medio y el indicador tira de verde a azul.
El citrato es la única fuente de carbono y se realiza sembrando la bacteria en la superficie de un agar de Simmon's inclinando el tubo |
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Coagulasa
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La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la
fibrina del plasma. Los Staphylococcus aureus patógenos dan una reacción
positiva y los no patógenos negativa
Se añade una suspensión densa de bacterias a un tubo pequeña con plasma y se incuba a 37 oC. Se observa la coagulación a las 4 y 24 h sin sacarlos de la estufa. |
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Contraste
de fases |
El microscopio de contraste de fases es un sistema en el
que se acentúa la diferencia del índice de refracción entre las células y el
medio incrementando así el contraste en células translúcidas sin uso de
colorantes.
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Descarboxilasa
de aminoácidos |
Los aminoácidos al perder el grupo carboxilo convierten en
aminas que incrementan el pH del medio y el indicador
(púrpura del bromocresol) vira a violeta. Las
descarboxilasas son útiles en la diferenciación de enterobacterias.
Las bacterias se inoculan en medios complejos que contienen lisina, ornitina o arginina al 1% y un indicador de pH (púrpura de bromocresol) |
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DNasa
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Algunas bacterias excretan nucleasas que despolimerizan el
DNA
Se hace una estría gruesa una placa conteniendo DNA. Se revela después de incubar con HCL 0,1 N que precipita el DNA no hidrolizado. |
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Esporas
(calentamiento) |
Las Endosporas son formadas por Bacillus y Clostridium.
Son Formas de resistencia, metabolicamente inactivas que resisten la alta
temperatura, la desecación y la radiación.
Las endosporas pueden sobrevivir al calentamiento y originan nuevas formas vegetativas en un medio de cultivo. Se inocula un tubo de caldo con una suspensión sospechosa de contener endosporas. Se calienta a 80 oC durante 10 min. Se enfría y se incuba a temperatura adecuada. |
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Fenilalanina desaminasa
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Las desaminasas catalizan la pérdida de NH3 en
un aminoácido originando un ácido carboxílico
Se inoculan tubos inclinados conteniendo un medio complejo y fenilalanina. Después de la incubación se añade una solución de cloruro férrico. |
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Fermentación
de azucares |
Las bacterias anaerobias o anaeróbicas facultativas a
menudo fermentan carbohidratos a ácidos orgánicos y gas (H2 o CO2).
Estos pueden detectarse incluyendo en el medio un indicador de pH y una
campana Durham. Se pueden ensayar diferentes azúcares como sustrato para
diferenciar especies sobre todo bacterias entéricas.
Se inocula la bacteria en un medio conteniendo una pequeña cantidad de peptona, un indicador de pH y una fuente de carbono fermentable al 1-2 % y se coloca dentro de los tubos una campana Durham. |
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Gram
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La tinción de Gram es la más importante de las tinciones
diferenciales. Las células Gram positivas retienen el cristal violeta cuando
se tratan con etanol mientras que las gram negativas no lo tienen y se tiñen
entonces del color rojo de la safranina.
Diferencias en la estructura de la pared son las responsables de este comportamiento. Se tiñe con cristal violeta Se trata con lugol como mordiente Se decolora con etanol 96o Se añade safranina como colorante de contraste |
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Hidrólisis
de Esculina |
La esculina contiene un carbohidrato unido a un compuesto
aromático. Este test se usa a menudo para distinguir especies de
Streptococcus.
Se crecen las bacterias en un medio complejo que contiene 0,01 % de esculina y un 0,05 de citrato férrico. |
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Hidrólisis
de gelatina |
La mayoría de los polímeros son demasiado grandes para ser
transportados dentro de las células. Las bacterias excretan enzimas
extracelulares que hidrolizan esos polímeros transportando al interior de la
célula en monómeros que les sirven para crecer.
La producción de proteasas es evaluada por incorporación de una proteína (gelatina o caseína) en un medio sólido en placa. La placa se inunda con ácido que precipita la proteína no hidrolizada. |
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Hidrólisis
de lípidos |
Algunas bacterias excretan lipasas extracelulares que
pueden hidrolizar lípidos grandes en sustratos de bajo peso molecular que son
trasportados al interior de la célula para ser utilizados en el crecimiento.
Una emulsión de lípidos y un indicador llamado Spirit Blue se incorporan en un medio sólido complejo. |
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Hidrólisis
del almidón |
Los polisacáridos, como el almidón son demasiados largos
para ser transportados al interior de la célula. Los microorganismos excretan
amilasas que hidrolizan esos polímeros hasta oligo o monosacáridos que pueden
usarse como sustratos para crecer.
La hidrólisis de almidón es analizada en medios conteniendo almidón en placa. Después de incubar se inundan las placas con lugol que al unirse con el almidón intacto forma un complejo púrpura. |
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Hidrólisis
del hipurato |
El hipurato es un compuesto orgánico aromático que puede
ser hidrolizado enzimáticamente originando benzoato y glicina. Este test se
usa a menudo para diferenciar especies de Streptococcus.
Una suspensión de bacterias se añade a una solución de hipurato y se incuba 2 horas. En ese momento se añade la nihidrina. |
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Indol
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Uno de los test del IMVIC utilizado para diferenciar
enterobacterias.
Existen bacterias que producen triptofanasa que convierte el triptófano en indol La bacteria se crece en medios que contienen triptófano (caldo de triptona). La presencia de indol se ensaya añadiendo dimetilaminobenzaldehído. |
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Inhibición
por KCN |
El KCN inhibe la cadena de transporte de electrones
uniéndose a los citocromos impidiendo el crecimiento microbiano. Sin embargo,
algunas bacterias no son inactivadas y pueden nacer.
Las bacterias se inoculan en caldo de peptona que contiene cianuro potásico. |
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Motilidad
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La movilidad de las bacterias es consecuencia de la
presencia de flagelos. El movimiento puede observarse en preparación en
fresco con el microscopio de contraste de fase
Para ver la movilidad se realiza una preparación en fresco que se observa en contraste de fases. La movilidad debe distinguirse del movimiento Browniano debido a las corrientes en la preparación. |
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O-F
(oxidación -fermentación) |
En condiciones aerobias las bacterias pueden oxidar la
glucosa hasta CO2 gas. El oxígeno es el aceptor final de e- en el
metabolismo respiratorio. en condiciones anaeróbicas en ausencia de un
aceptor de e- como nitrato, las bacterias sólo pueden utilizar la glucosa por
vía fermentativa. En este test se evalúa la capacidad de las bacterias para
oxidar y/o fermentar produciendo ácido que se detecta gracias al azul de
bromotimol (indicador de pH) Es útil en la distinción de pseudomonas y
enterobacterias.
Se inoculan tubos de medio con asas de punta recta. Uno de los tubos se recubre con aceite de parafina para aislarlo del oxígeno (tubo de fermentación) y otro no (tubo de oxidación) |
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Oxidasa
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La presencia de citocromo C oxidasa en la cadena de
trasporte de e- puede detectarse utilizando un aceptor de e- artificial
p-fenilendiamina. Este test se usa para diferenciar pseudomonas (positivo) de
enterobacterias (negativo)
Se impregnan discos de papel con parafenilandiamina y se coloca en un cultivo creciendo en placas de agar nutritivo. |
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Producción
de sulfhídrico |
Muchas bacterias producen sulfuro de hidrógeno a partir de
aminoácidos azufrados (cisteína o metionina) o tiosulfato.
La fermentación de sulfhídrico puede ser detectada incluyendo hierro reducido en el medio para formar un precipitado negro de FeS Se inocula un medio de agar nutritivo conteniendo tiosulfato metionina y sulfato ferroso. |
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Reducción
de nitrato |
Algunas bacterias pueden usar nitratos como aceptor final
de e- en la respiración. el nitrato puede ser reducido a nitrito o en un paso
más a gases (óxidos de nitrógeno). Las enterobacterias y pseudomonas son
usualmente positivos.
Las bacterias se inoculan en medios conteniendo nitrato potásico. El nitrito procedente de la reducción de células puede detectarse añadiendo alfanalfilamina y ácido sulfanílico produciéndose un color rojo. Se puede saber si el nitrato puede haberse reducido a más que a nitritos produciéndose gas. Si al añadir zinc en polvo no hay color rojo es que no hay nitrato porque se ha reducido a gas (desnitrificación) |
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Rojo
de
metilo |
Es uno de los test del IMVIC para bacterias entéricas. Algunas
vías fermentativas originan ácidos orgánicos mientras otras originan
productos que son neutros.
Las bacterias se crecen en caldo de glucosaçpeptona. Si se fermenta el azúcar el pH baja por debajo de 4.3. Se añade rojo de metilo como indicar que es rojo a pH <4.3. y amarillo a pH >4.3. |
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Tioglicolato
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Este medio se usa para determinar el efecto del oxígeno
sobre el crecimiento microbiano. Un tubo con medio semisólido contiene
Tioglicolato para reducir el potencial redox del medio. Así sólo hay oxígeno
en la superficie y no en el resto del tubo. Un indicador redox, resazurina,
indica si hay oxígeno (rojo) o no (incoloro).
El tubo es inoculado con un asa de punta y se incuba hasta que se produce su crecimiento. |
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Ureasa
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Este enzima hidroliza la urea (H2N-CO-NH2)
y origina amonio lo que producirá un incremento del pH que puede detectarse
con un indicador.
Las bacterias se inoculan en un medio con glucosa-peptona y urea al 2%. Como indicador de pH se utiliza rojo fenol |
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Utilización
Fuentes de Carbono |
La mayoría, pero no todas las bacterias pueden crecer en
medios simples con una única fuente de carbono. Este método permite ensayar
tal habilidad y la capacidad para utilizar sustratos específicos.
Las bacterias se inoculan en medios simples conteniendo diferentes sustratos orgánicos como fuentes de carbono y energía. |
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Voges-
Proskauer |
Uno de los test del IMVIC para enterobacterias es el Voges
Proskauer. Las especies que llevan a caso fermentación a butanodiol de la
glucosa acumulan acetoína en el medio.
Las bacterias se inoculan en caldo glucosa-peptona. Las especies que llevan a cabo la fermentación butanodiólica de la glucosa aumenta acetoína en el medio. Se añade alfanaftol en medio alcalino (KOH). La acetoína se convierte en diacetilo que reacciona formándose un color rojo |
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